大肠杆菌的鉴定

　　大肠杆菌属于一种发酵乳糖，它属于厌氧的革兰氏，阴性无芽孢杆菌，它主要来自于人畜的粪便，如果食物出现被大肠杆菌污染的现象，一般通过食品检测就能够检查出来，从而推断食物是不是符合标准。所以说在平时生活当中，大肠杆菌的检测方法是非常常用的，下面我们就来了解一下大肠杆菌的检测方法。

　　大肠杆菌的检测方法

　　食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

　　1设备和材料

　　1.1温箱：36±1℃。1.2冰箱:0～4℃。1.3恒温水浴:44.5±0.5℃。1.4天平。1.5显微镜。1.6均质器或乳钵。1.7平皿:直径为90mm。1.8试管。1.9吸管。1.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。1.11玻璃珠:直径约5mm。1.12载玻片。1.13酒精灯。1.14试管架。

　　2培养基和试剂

　　2.1乳糖胆盐发酵管:按GB4789.28中4.9规定。

　　2.2伊红美蓝琼脂平板:按GB4789.28中4.25规定。

　　2.3乳糖发酵管:按GB4789.28中4.10规定。

　　2.4EC肉汤:按GB4789.28中4.11规定。

　　2.5磷酸盐缓冲稀释液:按GB4789.28中3.22规定。

　　2.6生理盐水。

　　2.7革兰氏染色液:按GB4789.28中2.2规定。

　　3.1检样稀释

　　3.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8000-10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。

　　3.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。

　　3.1.3另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。

　　3.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。

　　3.2乳糖发酵试验

　　将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。

　　3.3分离培养

　　将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。

　　3.4证实试验

　　在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。

　　3.5报告

　　根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。

　　4粪大肠菌群(faecalcoliform)

　　4.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。

　　4.2结果报告

　　根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。