超雄综合症是由于有害化学物质、X线照射、环境因素影响、高龄妊娠、近亲配婚等,导致妊娠时染色体的数目、形态、结构及结合上发生变异所引起的疾病。羊水细胞的染色体检查,对于超雄综合症的产前诊断具有很大的特异性意义。
羊水细胞培养染色体检查测定原理,羊水细胞是胎儿皮肤、消化道、呼吸道和经生殖泌尿系统脱落的细胞,95%左右是死细胞,因此必须经过细胞培养,使活的细胞得到充分的增殖,才能收获细胞,进行核型分析。
操作方法如下:
1、取孕期16~20周羊水15~30ml,1000r/ml离心10min。
2、弃去多余上清液,留1ml羊水和沉淀细胞,轻轻打散成细胞悬液。
3、养基3ml及小牛血清1ml,置37℃温箱中培养。
4、培养7~10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。
5、待细胞集落扩大成片,并有许多透亮的圆形分裂细胞时,即可加入秋水仙素,使最终浓度为0.1~0.3μg/ml,置37℃温箱中再培养5~6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准:①以成纤维细胞为主要类型,成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察,生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。
6、如果细胞生长不旺盛,生长周期不齐或细胞老化,未达收获标准,可在原瓶继续传代培养。方法:在无菌条件下先倒去培养液,加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴,摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5~10滴,在37℃下轻轻摇动约5min,使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml,在37℃静置培养4~5h。再小心更换培养液,继续培养,一般传代后3~5天即可收获。
7、将培养液移至刻度离心管中,加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内,置37℃温箱中5min,然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中,与原培养液相混合,并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶,洗下的细胞也一并倒入该离心管,以1000r/min离心10min。
8、吸弃上清液,加入预温37℃的0.075mol/LKCl低渗液3~5ml,置37℃10~15min。
9、预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。
正常情况下染色体总数为46条;其中常染色体22对(序号为1~22);性染色体男性为XY,女性为XX;男性核型46,XY;女性核型46,XX。染色体检查适用于各种染色体数量异常:如唐氏综合征(21三体综合征)、18三体综合征、13三体综合征、8三体综合征、22三体综合征、先天性睾丸发育不全综合征、XXY综合征、特纳综合征、X三体和多X体综合征等。
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